TNF-α的來源和結(jié)構(gòu)：可引起內(nèi)毒素的毒性效應(yīng)

腫瘤壞死因子（tumor necrsis factor，TNF）與內(nèi)毒素密切相關(guān)。人們把來源于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的、能夠使腫瘤細(xì)胞壞死的血清物質(zhì)命名為 TNF-α，下面介紹TNF-α的來源和結(jié)構(gòu)。

一、TNF-α的來源

內(nèi)源性TNF（tumor necrsis factor，腫瘤壞死因子）是具有脂溶性的糖蛋白低聚物，廣泛存在于內(nèi)臟器官、皮膚、肌肉、白細(xì)胞、胚胎組織和神經(jīng)組織。TNF-α主要由LPS（lipopolysaccharide，脂多糖）激活的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生；而TNF-β（淋巴毒素-1）主要來源于T淋巴細(xì)胞，但肥大細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞、腸腺的嗜酸粒細(xì)胞以及一些腫瘤細(xì)胞也可以自發(fā)或經(jīng)過誘導(dǎo)產(chǎn)生TNF。在內(nèi)毒素血癥中，肝臟是血液TNF-α的主要來源，部分肝切除者可以耐受內(nèi)毒素的毒性效應(yīng)。

二、TNF-α的基因位點(diǎn)

TNF-α基因位于人染色體6p21.1～p22，在HLA基因群譜中靠近HLA-A位點(diǎn)，與HLA基因連鎖。TNF-α和TNF-β基因沿3'→5'方向緊密連鎖，相隔1.2kb。兩者均由4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子所組成。TNF-αmRNA長度為1.7kb，而小鼠TNF-α基因長度約為1kb，位于17號(hào)染色體上，在主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）的H-2D基因上游約70kb處。

三、TNF-α的轉(zhuǎn)錄調(diào)控

TNF-α基因的TATA盒在其轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)ATG上游20bp處，同時(shí)在其上游也存在其他各種調(diào)控元件，包括Y盒啟動(dòng)子、cAMP反應(yīng)元件、c-jun/AP-1以及至少有5個(gè)NF-κB增強(qiáng)子等結(jié)合位點(diǎn)。TNF-αmRNA的3'端非翻譯區(qū)還存在UUAUUUAU八個(gè)核苷酸序列結(jié)構(gòu)，許多細(xì)胞因子的mRNA中均有此結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)可使其mRNA穩(wěn)定性降低，半衰期縮短。TNF-a mRNA的穩(wěn)定性還受到3'非翻譯區(qū)的其他位點(diǎn)調(diào)節(jié)：①對(duì)放線菌素D敏感的位點(diǎn)。②對(duì)放線菌素D不敏感，此位點(diǎn)受LPS調(diào)節(jié)后，TNF-αmRNA 的穩(wěn)定性增高，顯著減低TNF-αmRNA的降解率，使TNF-αmRNA在細(xì)胞內(nèi)聚集100倍，增加TNF-α的蛋白質(zhì)翻譯，導(dǎo)致高TNF-α血癥，易出現(xiàn)內(nèi)毒素的毒性效應(yīng)。

四、TNF-α的構(gòu)成

成熟的TNF-α由157個(gè)氨基酸殘基組成，含有1個(gè)二硫鍵（C69~C101位點(diǎn)），無糖基化位點(diǎn)，pI為5.6。人TNF-α前體為233肽，N端76肽不是信號(hào)肽，卻能將TNF-α前體形式固定在細(xì)胞膜上，使成熟的分泌型TNF-α保留在細(xì)胞表面。TNF-α前體中疏水跨膜部分下游的Lys19和Lys20被豆蔻酸?；?/span>，可以介導(dǎo)TNF-α前體運(yùn)輸?shù)侥ど系倪^程，膜結(jié)合型的TNF-α是Ⅱ型跨膜蛋白（typeⅡ transmembrane protein），即C端在細(xì)胞外，N端留在胞質(zhì)內(nèi)；胞質(zhì)區(qū)有29個(gè)氨基酸，跨膜區(qū)有28個(gè)氨基酸，細(xì)胞外有176個(gè)氨基酸。膜型TNF-α有細(xì)胞毒理活性，可直接與相鄰細(xì)胞表面的TNF受體（TNF-αreceptor、TNFR）結(jié)合，發(fā)揮旁分泌效應(yīng)。小鼠TNF-α前體為235肽，成熟的TNF-α含有156個(gè)氨基酸殘基，有1個(gè)糖化位點(diǎn)，糖基化后并不影響其三聚體的形成。

TNF-α的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為β折疊，結(jié)晶學(xué)分析證明，天然TNF-α為以非共價(jià)鍵連接的三聚體，以三重軸對(duì)稱構(gòu)成一個(gè)鈴狀結(jié)構(gòu)；TNF-α單體有2個(gè)β折疊和5個(gè)反平行的β折疊串，外部的β折疊富含親水殘基，內(nèi)部的β折疊為疏水性殘基，單體之間相互結(jié)合形成穩(wěn)定的三聚體。單體的C端卷在β折疊內(nèi)，N端暴露在外。單體兩兩接觸區(qū)是TNF結(jié)合TNFR的結(jié)構(gòu)域，三聚體形成的三個(gè)結(jié)構(gòu)域結(jié)合三個(gè)相鄰或成簇的受體，使受體二聚化或三聚化，進(jìn)而誘導(dǎo)其生物學(xué)活性。