C3H/HeJ品系小鼠發(fā)生內毒素耐受現(xiàn)象的原因

C3H/HeJ小鼠細胞Ran（或 L.ps/Ran）發(fā)生點突變可使其功能缺陷，因而可以解釋C3H/HeJ品系小鼠為何發(fā)生內毒素耐受現(xiàn)象。依據(jù)有以下四點：①C3H/HeJ小鼠的Lpsd/Ran cDNA 的3'端非翻譯區(qū)（untranslated region）發(fā)生點突變，在870位點上胸腺密啶突變?yōu)榘茑?/span>，但編碼的蛋白質相同。②Lps/Ran基因作圖分析得出：Lps/Ran基因位于C3H/HeJ品系小鼠第4號染色體上，也在傳統(tǒng)的Lps基因位點區(qū)域內。③導入Lpsn/Ran cDNA可以恢復Lpsd/Ran的B細胞對內毒素的反應，但不能恢復對巨噬細胞的效應，即內毒素耐受反應在B細胞中消失；而導入Lpsd/Ran cDNA無類似現(xiàn)象。④使用腺病毒載體將Lpsd/Ran cDNA轉移到敏感小鼠體細胞內﹐能使敏感小鼠對內毒素反應發(fā)生耐受，表型類似于C3H/HeJ品系的小鼠；而轉入Lpsn/Ran cDNA無內毒素耐受現(xiàn)象。由此可見，Lps/Ran在某個環(huán)節(jié)也參與了內毒素信號轉導效應。

使用功能性cDNA表達克隆方法和C3H/HeJ的B淋巴細胞作為檢驗細胞，Wong等分離出Lpsn/Ran的cDNA，并編碼Ran/TC4 GTPase，其上游非翻譯區(qū)的870位點處由胞嘧啶取代其胸腺嘧啶，結果引起mRNA結構出現(xiàn)顯著改變。LpsdRan的cDNA表達在體內對內毒素敏感小鼠有抗休克保護反應，這是由于受到刺激的巨噬細胞所分泌的TNF-α，IL-1表達下調，兩種Lpsn/Ran和 LpsdRan的 mRNA 的穩(wěn)定性不存在差異，起初其蛋白質總量類似，但是在穩(wěn)定的狀態(tài)時，原代培養(yǎng)的巨噬細胞和B細胞中的Lpsd/Ran是Lpsn/Ran總量的5～10倍，兩種蛋白質均可以從細胞質遷移到細胞核內，但Lpsn/Ran遷移的速度比Lpsd/Ran要慢。

在穩(wěn)定狀態(tài)時，盡管兩種蛋白質是完-全相同的，但Lpsn/Ran的總量卻下降，由于兩種mRNA 的結構不同，可能mRNA在細胞內定位存在著差異。更多的Lpsd/Ran GTPase積聚在細胞核內，確信能夠改變信號轉導的效力，所以出現(xiàn)LPS介導的信號轉導的下調性生物學效應。因此，Lps/Ran是LPS介導的信號轉導的重要靶位，Lpsd/Ran cDNA可能在基因治療休克方面有益。

可以想像，LPS通過酶學級聯(lián)反應激活多個轉錄因子，但這些轉錄因子需要轉位入細胞核內，方可以與基因的調控序列結合，并發(fā)揮其效應。而這些分子均為大分子物質，需要通過核孔復合物參與，即Ran等參與，而Ran蛋白質表達的量又直接影響轉錄因子入核的效率和數(shù)量；同時，在基因轉錄成mRNA時，也需要轉出到細胞質，才可以翻譯蛋白質，如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、NO等，如果在mRNA轉出時出現(xiàn)障礙，勢必影響細胞因子的表達，若炎癥因子表達低下，則其表型對內毒素耐受，類似于TLR4突變的表型。所以，有理由認為可以通過轉染突變型Ran到宿主細胞內來促使巨噬細胞對內毒素產生耐受，以減少細胞因子的分泌，并降低內毒素血癥等敗血癥的病死率。

機體的調節(jié)也包括內毒素耐受的發(fā)生和吞噬細胞對GNB和內化功能的增強。這些因素對內毒素的信號轉導效應產生負性調節(jié)作用。