幾種血液中內(nèi)毒素的前處理測(cè)定方法

（1）氯仿提取法：測(cè)定方法如下：

（2）稀釋加熱法：即水稀釋加熱法作為簡(jiǎn)便的前處理方法被普遍采用，由于稀釋倍數(shù)，加熱溫度和時(shí)間不同，結(jié)果也不全相同，其中主要方法見(jiàn)表6。

在這些方法中由于不確定因素太多，因此值得探索的地方很多。為了克服稀釋加熱法的缺陷，避免濁度生成，人們開(kāi)發(fā)出了使用表面活性劑（0.04% TritonX -100）稀釋?zhuān)?/span>80℃5分鐘加熱處理方法。這個(gè)前處理方法，能得到很好的血漿內(nèi)毒素回收率。減少非特異性濁度所引起的假陽(yáng)性反應(yīng)。尤其是日本和光純藥的Toxinonuter ET201采用比濁時(shí)間分析法檢測(cè)，能得到很好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（3）高氯酸法（PCA）與新高氯酸法（New PCA）：所謂高氯酸法（PCA），即血漿加高氯酸后，產(chǎn)生的變性沉淀物用離心法除去，用上清液進(jìn)行比色測(cè)定。后來(lái)人們又發(fā)現(xiàn)這些沉淀物中含有內(nèi)毒素活性物質(zhì)，因而對(duì)變性的血漿蛋白不進(jìn)行沉淀，而進(jìn)行現(xiàn)溶解處理，這就是新高氯酸法（New PCA），一般新高氯酸法的測(cè)定結(jié)果要比高氯酸法高8~10倍。

一般高氯酸法只測(cè)定血中游離的內(nèi)毒素，而新高氯酸法可以將游離內(nèi)毒素和蛋白結(jié)合內(nèi)毒素一起測(cè)定出來(lái)。也就是說(shuō)，新高氯酸的測(cè)定值減去高氯酸法的測(cè)定值，就等于結(jié)合型內(nèi)毒素的量；我們可以同時(shí)使用兩種方法檢測(cè)以查明內(nèi)毒素與蛋白的結(jié)合情況，并且可以對(duì)病人的病情發(fā)展進(jìn)行分析。具體測(cè)定方法如下所示：

另外，在我們對(duì)血漿中的內(nèi)毒素和鱟試驗(yàn)法檢測(cè)時(shí)，前處理加熱對(duì)血漿中和水中內(nèi)毒素影響要有一個(gè)認(rèn)識(shí)。細(xì)菌內(nèi)毒素在人體內(nèi)的分布往往以?xún)煞N方式存在，一種為游離型，另外一種為蛋白結(jié)合型。我們知道，細(xì)菌內(nèi)毒素在水中存在時(shí)對(duì)加熱是十分敏感的，而在血中的情況又是怎樣的？人們通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：血漿中的內(nèi)毒素在經(jīng)過(guò)100℃加熱1分鐘或10分鐘，其標(biāo)準(zhǔn)曲線沒(méi)有出現(xiàn)明顯的差別。而水中的內(nèi)毒素經(jīng)1分鐘加熱后，其標(biāo)準(zhǔn)曲線趨向平坦，10分鐘加熱后，接近水平。這可能是脂多糖分子在水中加熱后出現(xiàn)集結(jié)的原故。而在血漿的內(nèi)毒素則不同，團(tuán)塊的形成會(huì)受到血小板的抑制，內(nèi)毒素可與多種血液成分結(jié)合，如血小板﹑抗體、粘性蛋白等，這些物質(zhì)可能保護(hù)血漿內(nèi)毒素與LAL發(fā)生反應(yīng)。因此這就是加熱血漿也不會(huì)破壞其內(nèi)毒素的原因。