除去血中干擾物質(zhì)的前處理方法

一般來說由于血液的組成比較復(fù)雜，其中的許多物質(zhì)尤其是高等動物的血漿或血清對TAL（LAL）試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)很強(qiáng)的干擾作用。因此當(dāng)我們對這類樣品的內(nèi)毒素進(jìn)行測定時(shí)，必須將其中的干擾物質(zhì)除去后，方可進(jìn)行檢測。

目前作為血漿中的干擾物質(zhì)主要有：各種蛋白酶抑制劑、內(nèi)毒素結(jié)合蛋白以及纖溶酶原抑制劑等物質(zhì)，對于比色法由于Xa因子能分解 Boc-LEU-Gly-Arg-PNA 肽鏈。因此在測定前排除這些干擾物是十分必要的。

除去血中干擾物質(zhì)的前處理方法主要有以下幾種，現(xiàn)分別介紹如下：

（1）稀釋加熱法：血漿用溶解水進(jìn)行3~10倍稀釋，然后在37 ~ 100℃水中進(jìn)行加熱處理。保溫時(shí)間一般在5~10分鐘；

（2）氯仿提取法：血漿加等量的氯仿振動3小時(shí)，然后取上層進(jìn)行檢測；

（3）乙-醚處理法：血漿加入乙-醚處理并在40℃保溫將乙-醚去除；

（4）三氟代乙酸法：血漿中加入乙酸調(diào)節(jié)pH4.0后用K2HPO4調(diào)節(jié)pH到7~7.5；

（5）表面活性劑處理法：同稀釋加熱法一樣，只是將稀釋用水改為表面活性劑；

（6）凝膠過濾法；

（7）堿性處理法：血漿用0.2NNaOH37℃保溫10分鐘后用HCl中和；

（8）高氯酸法（PCA）或新高氯酸法（New PCA）；

（9）Beads法：將吸附內(nèi)毒素的特殊樹脂放入血漿中，取出后，加入LAL試劑進(jìn)行反應(yīng)。

在這些方法中，常用的主要有：氯仿提取法、稀釋加熱法以及高氯酸（PCA）法和新高氯酸（New PCA）法，其中前兩種方法由于內(nèi)毒素回收率﹑假陽性等問題的存在，因此在測定時(shí)需要探討，而PCA法（New PCA法），由于添加內(nèi)毒素的回收率好，目前在日本主要用于臨床前處理。