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在前兩期中,我們分別探討了細(xì)菌內(nèi)毒素檢測中的常見問題以及檢測儀器的選擇與操作細(xì)節(jié),為細(xì)菌內(nèi)毒素檢測工作提供了全面的指導(dǎo)。然而,細(xì)菌內(nèi)毒素檢測領(lǐng)域的復(fù)雜性遠不止于此,試劑的選擇、保存條件及其與檢測方法的匹配同樣對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生深遠影響。
本期,我們將聚焦于細(xì)菌內(nèi)毒素試劑的相關(guān)問題,旨在幫助相關(guān)從業(yè)者更加深入地理解試劑在細(xì)菌內(nèi)毒素檢測中的關(guān)鍵作用,進一步提升檢測工作的精確性和效率。
細(xì)菌內(nèi)毒素特異性試劑是指一類專門設(shè)計用于僅與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生反應(yīng)的檢測試劑。與之相對,常規(guī)的鱟試劑除了能夠檢測細(xì)菌內(nèi)毒素外,還可能與真菌細(xì)胞壁成分如(1→3)-β-D-葡聚糖發(fā)生交叉反應(yīng)。
因此,細(xì)菌內(nèi)毒素特異性試劑在檢測過程中提供了更高的準(zhǔn)確性和特異性,避免了因非細(xì)菌內(nèi)毒素成分引起的假陽性結(jié)果。
(一)單次檢測:在這種檢測方式中,單次分量的鱟試劑已預(yù)先被添加到反應(yīng)試管中。檢測時,只需將一定體積的測試溶液加入試管,即可進行內(nèi)毒素的檢測。這種方式簡化了操作步驟,適用于快速、高效的檢測需求。
(二)多次檢測:在多次檢測中,鱟試劑首先需要用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測用水進行溶解。然后,將溶解后的鱟試劑按一定等分量分配到反應(yīng)試管或微孔板中,供后續(xù)多次檢測使用。這種方式雖然操作相對復(fù)雜,但能夠靈活應(yīng)對大量樣本的檢測需求,且降低了試劑的浪費。
為了確保試劑的有效性和準(zhǔn)確性,所有試劑都應(yīng)冷藏保存。具體保存條件和期限如下:
??Pyrotell® MTV(凝膠法鱟試劑):應(yīng)保存在-20℃至8℃之間,直至產(chǎn)品有效期結(jié)束。
??Pyrotell® STV(凝膠法鱟試劑):同樣應(yīng)保存在-20℃至8℃之間,直至產(chǎn)品有效期結(jié)束。
??Pyrosate®(凝膠法內(nèi)毒素快速檢測試劑):可在2℃至25℃之間保存,直至產(chǎn)品有效期。
??Pyrotell®-T(濁度法鱟試劑):應(yīng)保存在-20℃至8℃之間,并在復(fù)溶后于2-8℃下保存24小時,或-20℃下凍存3個月(只能凍融一次)。
??Pyrochrome®(顯色法鱟試劑):應(yīng)保存在-20℃至8℃之間,并在復(fù)溶后于2-8℃下保存8小時(不能凍存)。
??PyroSmart NextGen® (重組鱟試劑):鱟試劑和復(fù)溶緩沖液應(yīng)儲存于2-8℃環(huán)境中。使用前需恢復(fù)室溫至少30分鐘,并在復(fù)溶后室溫放置,于3-20分鐘內(nèi)使用。
??細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(CSE):0.5μg/vial的CSE(E0005)應(yīng)在2-8℃下保存,并在復(fù)溶后不超過4周內(nèi)使用(不能凍存)。系列稀釋前需至少渦旋30秒。125μg/vial的CSE(E0125)同樣應(yīng)在2-8℃下保存,并在復(fù)溶后不超過3個月內(nèi)使用(不能凍存)。系列稀釋前也需至少渦旋30秒。