國內(nèi)人血漿內(nèi)毒素檢測的實驗操作方法

一、樣品的前處理
1、取0.5ml人血漿（S），按如下方法稀釋：0. 5mlS+0.5mID+1.5mlW→2.5mlS5
式中：D為專用的稀釋劑；W為專用的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測（BET）用水；S5為稀釋了5倍的血漿，下標(biāo)數(shù)字表示稀釋倍數(shù)。
2、把裝有S5的小瓶置70℃的水浴中10分鐘。
3、把經(jīng)加熱處理的裝有S5的小瓶用3000rpm離心10分鐘，然后吸取上清液（仍記為S5）作 BET。
4、如果不立即作BET，可把經(jīng)離心的裝有S5的小瓶置2 ~3℃冰箱保存，可在3天內(nèi)作BET。
 

 

二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素
1、取效價為10Eu的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（CSE）一支，開啟，加入0. 1mlW溶解，然后用封口膜封閉瓶口。
2、把裝CSE的安瓿放在旋渦混合器上強烈混合10分鐘得到濃度為10Eu/ml的CSE溶液，記為E10（E表示CSE，下標(biāo)數(shù)字表示濃度）。
3、按下圖步驟制備CSE濃度系列：
 

 

以上均需在旋渦混合器混合。

• 制備待測樣品

如下圖所示：
 

 

四、取鱟試劑（TAL）一支，按標(biāo)示裝量加W復(fù)溶
 
五、試管設(shè)置與加樣
在電腦的“檢測"程序上按下述方法設(shè)置反應(yīng)試管，并取反應(yīng)試管按下表要求加樣：
 

 

六、檢測
把加好樣的試管按編號順序插入檢測儀器的反應(yīng)孔中反應(yīng)，每支試管在插入反應(yīng)孔前應(yīng)輕輕晃動搖勻試管中的內(nèi)容物。
 
七、結(jié)果處理
1、反應(yīng)的數(shù)據(jù)采集、處理、結(jié)果表達等均由檢測儀自動完成。
2、日常的檢測只需要設(shè)置編號1，2，9，10，11，12號的反應(yīng)試管，利用儲存的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可。